ترانسفورماسیون باکتری
ترانسفورماسیون باکتریایی تکنیکی است که برای وارد کردن DNA خارجی (مانند پلاسمید با ژن مورد نظر) به سلول های باکتریایی استفاده می شود. این یک گام مهم در ایجاد سویه های باکتریایی نوترکیب است. در اینجا نحوه عملکرد آن به طور معمول است:
آماده سازی سلول های دارای صلاحیت:
سلولهای باکتریایی با درمان آنها با محلولهای خاصی که نفوذپذیری آنها در برابر DNA را افزایش میدهد، «صلاحیت» پیدا میکنند. این اجازه می دهد تا DNA خارجی وارد سلول شود.
اختلاط DNA و سلولهای دارای صلاحیت:
DNA خارجی (پلاسمید با ژن مورد نظر) و سلول های دارای صلاحیت با هم مخلوط می شوند.
درمان شوک حرارتی:
مخلوط DNA و سلولها تحت یک شوک حرارتی مختصر قرار میگیرد که معمولاً شامل تغییر سریع دما (به عنوان مثال، از سرد به گرم و برگشت به سرد میشود). این شوک حرارتی به DNA کمک می کند تا وارد سلول های باکتریایی شود.
دوره رکاوری:
پس از شوک حرارتی، سلول ها اجازه دارند در یک محیط غنی از مواد مغذی بازیابی شوند، که باعث رشد آنها و بیان هر گونه ژن مقاومتی که توسط پلاسمید معرفی شده حمل می شود، می شود.
انتخاب:
آنتی بیوتیک ها یا سایر نشانگرهای انتخابی روی DNA معرفی شده (به عنوان مثال، یک پلاسمید) برای رشد انتخابی تنها سلول هایی استفاده می شوند که با موفقیت DNA خارجی را جذب کردند.
غربالگری:
تأیید تبدیل موفقیت آمیز اغلب با تجزیه و تحلیل DNA سلول های تبدیل شده، معمولاً از طریق تکنیک هایی مانند PCR یا هضم آنزیم محدود انجام می شود.
ترانسفورماسیون باکتریایی یک تکنیک پرکاربرد در زیستشناسی مولکولی و بیوتکنولوژی برای کارهایی مانند شبیهسازی ژنها، بیان پروتئینهای نوترکیب و انجام مطالعات عملکردی است. این سنگ بنای ایجاد ارگانیسم های اصلاح شده ژنتیکی (GMOs) و تولید محصولات مفید در صنایع مختلف است.
