انواع روش های PCR محور

همان طور که میدانیم استفاده از روش‌های مبتنی بر PCR به منظور تشخیص، تکثیر توالی هدف،تحقیقات و … از جهات مختلفی از جمله حساسیت ،اختصاصیت، سرعت،حجم نمونه مورد نیاز، استاندارد سازی و… نسبت به سایر روش‌ها ارجحیت دارد و توان انجام آزمایش را بهبود میبخشد

انواع روش های PCR محور

Conventional PCR-1 :

روش پایه به منظور تکثیر DNA هدف با استفاده از پرایمرها و آنزیم DNA پلیمراز است.و در نهایت به منظور تفسیر نتایج نیاز به الکتروفورز است.

Real_time PCR(qPCR)-2 :

این روش دامنه دینامیکی زیادی دارد و تکثیر و بررسی DNA را در یک مرحله انجام میدهد. در این روش غلظت اسید نوکلئیک موجود در نمونه با استفاده از رنگ فلورسنت یا استفاده از الیگونوکلئوتید های دارای مارکرفلورسنت کمی شده که ارتباط غلظت محصول PCR با شدت فلورسانس را به دست می‌آورد. این روش به دلیل توانایی در اندازه‌گیری غلظت DNA در محدوده وسیع، حساسیت بالا و توانایی پردازش همزمان چند نمونه کاربرد گسترده‌ای دارد و به عنوان ابزاری مفید و کاربردی در تشخیص سریع بیماری ها بکار میرود.

RT_PCR-3 :

روش تغیبر یافته PCR میباشد که طی آن ابتدا تبدیل RNA به cDNA بوسیله آنزیم Reverse transcriptase صورت میگیرد. این روش بیشتر به منظور تشخیص ویروس ها با ژنوم RNA کاربرد دارد. به منظور کمی سازی نتایج میتوان از RT_qPCR استفاده کرد و باقی مراحل مانند سایر روش ها پیش میرود.

Multiplex PCR (m_PCR)-4 :

یک تکنیک بیولوژی مولکولی پرکاربرد که جهت بررسی چند ژن در یک واکنش با استفاده از چندین توالی هدف و بوسیله چندین جفت پرایمر بکار میرود. از این رو نیاز به طراحی پرایمر دقیقی دارد. از کاربردهای این روش میتوان به بررسی ژنوتیپ، تجزیه و تحلیل mutations و تشخیص عوامل بیماری‌زا اشاره کرد.

Nested PCR-5 :

این روش به منظور تکثیر ناحیه مورد نظر و با هدف حذف ناحیه غیر اختصاصی تکثیر شده با دو مجموعه پرایمر و دو واکنش متوالی PCR صورت می‌گیرد بنابراین اختصاصیت بالایی دارد. این روش برای میکرو‌‌‌ارگانیسم هایی که در مقادیر بسیار کمی وجود دارند کاربرد وسیعی دارد.

RFLP_PCR  (Restriction Fragment Length- PCR) -6 :

پلی مورفیسم قطعات طولی محدودشونده (RFLP) روشی است به منظور بررسی تغییرات در توالی DNA همولوگ به منظور تعیین موقعیت های ژن در یک توالی و تشخیص جمعیت و گونه ها  بکار میرود. البته در روش RFLP_PCR به علت استفاده  از الکتروفورز عمودی جهت مشاهده باندها، مدت زمان آزمایش نسبت به روش AS_PCR حداقل یک روز افزایش میابد و همچنین نیاز است خطرات استفاده از ژل اکریل آمید به جهت سرطان زا بودن را مورد توجه قرار داد. به نظر می‌رسد روشAS_PCR  با حساسیت و ویژگی یکسان نسبت به RFLP_PCR به علت زمان کمتر و عدم استفاده از ژل اکریل امید ارجحیت دارد.

Allele_specific PCR (AS_PCR)-7 :

تکنیکی مبتنی بر آغازگرهای اختصاصی آلل است که میتواند برای تجزیه و تحلیل SNP بکار رود. همچنین از این روش میتوان در جهت تشخیص یماری ها استفاده کرد.برای مثال با توجه به کاربرد این روش در تشخیص جهش میتواند به منظور شناسایی سل مقاوم به دارو بکار رود.

Digital PCR/Droplet digital PCR(ddPCR)-8 :

روش جدید برای کمی‌سازی مطلق نوکلئیک اسید است که از نسبت سیگنال‌های مثبت و منفی برای بررسی تعداد مطلق مولکول‌های هدف در نمونه استفاده می‌شود و نیاز به منحنی کالیبراسیون نمیباشد.این روش در تشخیص بیماری ها مورد توجه قرار میگیرد.

 Loop_Mediated Isothermal Amplification (LAMP)-9:

اساس این تکنیک تکثیر ایزوترمال DNA با استفاده از پرایمرها ی متعدد است و در تشخیص سریع DNA بدون نیاز به چرخه حرارتی کاربرد دارد. مهم ترین مزایای استفاده از این تکنیک سادگی آن است.

​