تکنیک Colony Count
تست Colony Count یک روش استاندارد در بیولوژی و علوم زیستی است که برای شمارش تعداد باکتریها یا سایر میکروارگانیسمها در یک نمونه استفاده میشود .همچنین در کنترل کیفیت محیطهای غذایی، داروها، و سایر صنایع مورد استفاده قرار میگیرد تا سطح آلودگی میکروبی را ارزیابی کند. این فرآیند به تشکیل کلونهای ایجاد شده توسط یک میکروارگانیسم میپردازد.
چند باکتری در یک Colony-forming units(CFU) وجود دارد؟
واحدهای تشکیل دهنده کلنی برای تعیین کمیت نتایج در بسیاری از روشهای شمارش میکروبیولوژیکی استفاده میشوند. یک واحد تشکیل دهنده کلنی معمولاً یک باکتری یا گروه کوچکی از باکتری است که قادر به تکثیر چندین بار برای تشکیل یک کلنی منفرد و قابل مشاهده است. اصطلاح CFU به این دلیل استفاده می شود که نمی توان مطمئن بود که هر کلنی فقط از یک باکتری به وجود آمده است.
تفاوت بین کلنی و CFU چیست؟
CFU مخفف Colony Forming Units است. این به معنای تعداد میکروارگانیسم های زنده و فعال در یک محیط است. اینها معمولاً بر حسب CFU در هر گرم یا در هر میلی لیتر اندازه گیری می شوند. کلنی به کلونی های منفرد باکتری، مخمر یا کپک که با هم رشد می کنند، اطلاق می شود. هرکلنی به عنوان خوشه ای متشکل از حداقل 50 سلول تعریف می شود که اغلب فقط می تواند از طریق میکروسکوپی تعیین شود.
مراحل انجام تست Colony Count به صورت کلی عبارتند از:
1-آمادهسازی نمونه:
نمونهای از محیطی که شامل میکروارگانیسمهاست، گرفته میشود.
رقیق کردن نمونهها، کشت دادن و انکوبه کردن
اگر به سادگی یک نمونه میکروبی را روی یک پلیت آگار کشت دهید، تعداد زیادی واحد تشکیل دهنده کلنی خواهید دید که کلنیهای جداگانه با هم ترکیب می شوند و شمارش آنها غیرممکن میشود. برای حل این مشکل، نمونه را در یک محیط مایع میکس کنید، مقدار کمی از آن مخلوط را بردارید و آن را بیشتر رقیق کنید.
2-کشت نمونه بر روی محیط کشت:
نمونه روی یک محیط کشت مناسب کشت داده میشود. این محیط شامل تمامی عوامل لازم برای رشد میکروارگانیسمها است.
3-انکوباسیون:
نمونه کاشته شده به مدت زمان مشخصی در شرایط حاکم بر رشد میکروارگانیسمها نگهداری میشود.
4-شمارش کلونها:
پس از انکوباسیون، کلونهای ناشی از یک میکروارگانیسم را با چشم غیرمسلح یا ابزارهای خاص شمارش میکنند. در برخی موارد، اصلاحاتی ممکن است اعمال شود تا به دقت بیشتری در شمارش برسیم، مانند در نظر گرفتن اندازه کلون یا اعمال تصحیحهای زمینهای. با استفاده از هموسایتومتر و یا محفظه ی شمارش می توان شمارش مستقیم انجام داد.
شمارش دستی
ترفند اصلی در شمارش کلنیها این است که هر نقطه کلنی را یک بار بشمارید. یک روش به این صورت است که ظرف پتری را روی یک پسزمینه شبکهای قرار میدهید و کلنیها را در هر سلول شبکه شمارش میکنید و در یک الگوی مشخص در تمام سلولهای شبکه حرکت میکنید. علامت گذاری کلنیهای شمارش شده در پشت ظرف پتری نیز می تواند یک عمل مفید باشد. به طور کلی، شما باید حداقل سه پلیت را بشمارید
شمارش خودکار
خطای انسانی به زمان شمارش دستی کلونیها می افزاید. برای بهبود دقت و کارایی، ظرف پتری را در دستگاه شمارش کلنی خودکار قرار دهید. شمارندههای کلونی خودکار تصویری از پلیت میگیرند، کلنیها را از پسزمینه جدا میکنند و سپس از یک الگوریتم برای شمارش کلنیهای روی پلیت استفاده میکنند
5-گزارش نتایج:
نتایج به صورت تعداد کلونها در هر واحد حجم یا وزن نمونه ارائه میشود.
